Autor o autores

SAINZ J, COLLADO MD, HASSAN L, BLANCO A, GARCÍA F, LÓPEZ FJ, FERRER MA, GARCÍA A, RAMÍREZ C, CÁLIZ R

E-Mail de Contacto

soanre@soanre.es

Centro

Hospital Universitario Virgen de las Nieves

Tema

Publicacion

Objetivos

La AR de inicio es un término clínico que se ha definido, dentro de los
criterios de clasificación de la ACR [1], para AR con una evolución menor de
dos años. El estudio de la AR en esta fase inicial, puede dar una serie de
pistas sobre su progresión y conducir a una mejora del tratamiento
empleado. El estudio del perfil de expresión génica por microarrays en
células de sangre periférica, nos permite abordar el estudio de la evolución
de esta enfermedad y de su patogénesis [2]. Así pues, el objetivo de nuestro
trabajo es caracterizar el patrón de expresión génica en pacientes con AR de
inicio, respecto al de controles sanos e identificar los genes implicados en los
mecanismos moleculares que participan en el desarrollo de la enfermedad.

Pacientes y Metodo

El diagnóstico de AR temprana se llevó acabo siguiendo los criterios de la
ACR previamente establecidos [1]. El ARN total se obtuvo a partir de 10 ml
de sangre periférica en 2 pacientes con AR de inicio (<2 años de evolución)
y en 2 individuos controles sanos utilizando tubos PAXgeneTMBlood RNA y
RNeasy Mini Kit (QIAGEN). Para definir el perfil de expresión génica tanto en
pacientes con AR temprana como en individuos sanos se utilizó el Sistema
de Bioarray de CodeLink (GE Healthcare). El perfil de expresión se obtuvo
por duplicado en dos placas de microarrays de genoma completo humano de
CodeLink (GE Healthcare) que contienen 55.776 sondas de oligonucleótidos,
según el protocolo de esta compañía y después de comprobar la calidad del
ARN total por electroforesis capilar. Los microarrays se analizaron por medio
en un escáner Genepix 4000B (Axon Instruments) y el software CodeLink
Expression Analysis v4.0 (GE Healthcare).

Resultados

Al comparar el perfil de expresión génica de pacientes con AR de inicio con el
perfil de expresión génica de individuos controles sanos, se encontraron 67
genes sobre-expresados (>2fold) en los pacientes con AR de inicio que
fueron clasificados funcionalmente:
METABOLISMO DE BIOPOLÍMEROS (10 genes):
KLF1;
tt44g04x1 NCI_CGAP_GC6 cDNA clone IMAGE:2243670 3′;
MAPK8IP1;
Soares placenta Nb2HP cDNA clone IMAGp998L15208;
KIAA0485 protein;
ab03b04s1 Stratagene fetal retina 937202 cDNA clone IMAGE:839695 3′
qf54h05x1 Soares_testis_NHT cDNA clone IMAGE:1753881 3′
proteasome subunit HsC10-II, complete cds; clone IMAGE:5266106;
clone IMAGE:4717361
AGENCOURT_7763267 NIH_MGC_92 cDNA clone IMAGE:6013351 5′
ACTIVIDAD CATALÍTICA (14 genes):
tt44g04x1 NCI_CGAP_GC6 cDNA clone IMAGE:2243670 3′;
UI-H-BI2-ahk-d-09-0-UIs1 NCI_CGAP_Sub4 cDNA clone IMAGE:2727208 3′;
Soares placenta Nb2HP cDNA clone IMAGp998L15208 ;
GCAT;
he34c01x1 NCI_CGAP_CML1 cDNA clone IMAGE:2920896 3′;
ab03b04s1 Stratagene fetal retina 937202 cDNA clone IMAGE:839695 3′ ;
qf54h05x1 Soares_testis_NHT cDNA clone IMAGE:1753881 3′ ;
mRNA for proteasome subunit HsC10-II, complete cds ;
NCI_CGAP_GCB1 cDNA clone IMAGE:1318617 3′ similar to contains Alu
repetitive element;
he05h05x1 NCI_CGAP_CML1 cDNA clone IMAGE:2918169 3′ similar to
contains OFR.t1 OFR repetitive element ;
QV2-HT0577-160500-220-a01 HT0577 Homo sapiens Cdna, full length insert
cDNA YQ03C01;
UI-1-BB1p-avd-f-06-0-UIs1 NCI_CGAP_Pl6 cDNA clone UI-1-BB1p-avd-f-
06-0-UI 3′;
clone IMAGE:4717361;
AGENCOURT_7763267 NIH_MGC_92 cDNA clone IMAGE:6013351 5′
COMUNICACIÓN CELULAR (9 genes):
hv32g04x1 NCI_CGAP_Lu24 cDNA clone IMAGE:3175158 3′;
he34c01x1 NCI_CGAP_CML1 cDNA clone IMAGE:2920896 3′;
MAPK8IP1;
ts86d10x1 NCI_CGAP_GC6 cDNA clone IMAGE:2238163 3′;
inversin (INVS), transcript variant 1, mRNA
yi11a11s1 Soares placenta Nb2HP cDNA clone IMAGE:138908 3′;
UI-H-BI4-aow-b-10-0-UIs1 NCI_CGAP_Sub8 cDNA clone IMAGE:3086178 3′;
clone IMAGE:5266106;
ac04a03s1 Stratagene lung (#937210) cDNA clone IMAGE:855436 3′
METABOLISMO MACROMOLECULAR (9 genes):
tt44g04x1 NCI_CGAP_GC6 cDNA clone IMAGE:2243670 3′;
hv32g04x1 NCI_CGAP_Lu24 cDNA clone IMAGE:3175158 3′
Soares placenta Nb2HP cDNA clone IMAGp998L15208;
ab03b04s1 Stratagene fetal retina 937202 cDNA clone IMAGE:839695 3′;
qf54h05x1 Soares_testis_NHT cDNA clone IMAGE:1753881 3′;
mRNA for proteasome subunit HsC10-II, complete cds;
clone IMAGE:5266106;
clone IMAGE:4717361;
MAPK8IP1
REGULACIÓN DE LA TRASCRIPCIÓN (12 genes):
KLF1;
hv32g04x1 NCI_CGAP_Lu24 cDNA clone IMAGE:3175158 3′;
MAPK8IP1;
zo23d12x5 Stratagene colon (#937204) cDNA clone IMAGE:587735 3′
he34c01x1 NCI_CGAP_CML1 cDNA clone IMAGE:2920896 3′;
KIAA0485 protein;
GLC cDNA clone GLCDDG05 3′;
inversin (INVS), transcript variant 1, mRNA;
yi11a11s1 Soares placenta Nb2HP cDNA clone IMAGE:138908 3′;
UI-H-BI4-aow-b-10-0-UIs1 NCI_CGAP_Sub8 cDNA clone IMAGE:3086178 3′;
clone IMAGE:5266106;
ac04a03s1 Stratagene lung (#937210) cDNA clone IMAGE:855436 3′
Además, se encontraron 42 genes sobre-expresados con otras funciones.

Conclusiones

El estudio comparativo del perfil de expresión génica en pacientes con AR de
inicio respecto al de controles sanos, nos puede indicar qué genes y procesos
biológicos pueden tener relevancia en la patogénesisy la evolución de esta
enfermedad. Además, este tipo de estudios pueden dar lugar posteriormente
identificación de nuevas dianas terapéuticas.
Bibliografía
1. Arnett FC, Edworthy SM, Bloch DA, et al.: The American Rheumatism
Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis.
Arthritis Rheum 1988, 31: 315-324.
2. Bovin LF, Rieneck K, Workman C, et al. Blood cell gene expression
profiling in rheumatoid arthritis. Discriminative genes and effect of
rheumatoid factor. Immunol Lett 2004; 93: 217-226.